Situata al piano nobile di palazzo Pitti, la Galleria raccoglie le numerose opere d'arte che formavano le collezioni granducali. Nelle sale riccamente affrescate e tappezzate, trovano posto capolavori del '500 e '600 di artisti italiani come Raffaello, Tiziano, Andrea del Sarto e Caravaggio, oltre a fiamminghi, francesi e inglesi. Qui erano anche gli appartamenti delle famiglie Medici e Lorena e, sia pure con funzioni prevalentemente di rappresentanza, dei Savoia: queste stanze sono visibili ancora oggi secondo l'allestimento testimoniato dall'inventario del 1916.

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